RNA恒溫快速擴增試劑盒（熒光型）使用說明書

原理概述：

本試劑盒基于一種常溫恒溫核酸快速擴增技術：在常溫恒溫下，特殊修飾的反轉(zhuǎn)錄酶利用特異性引物DNA和模板RNA合成cDNA鏈，反應體系中的重組酶、單鏈DNA結(jié)合蛋白和DNA聚合酶以新合成的cDNA鏈為模板進行快速核酸擴增反應。本試劑盒在42 oC下，依賴核酸外切酶的作用，加入根據(jù)模版設計的特異的分子探針，使用熒光監(jiān)測設備能實現(xiàn)對目標片段擴增過程的實時監(jiān)控。適用于實驗室級別的RNA擴增以及其他檢測用途的RNA擴增使用。

產(chǎn)品特點：

本試劑盒具有靈敏度高、特異性強、反應時間短（僅需20 mins）等優(yōu)點，反應組分為干粉狀態(tài)，操作簡便，易于保存。

可適用于各種品牌的熒光定量PCR儀，恒溫熒光擴增儀器等熒光檢測設備。

引物設計：

建議使用長度在 30-35 bp的引物，引物過短會影響擴增速度和檢測靈敏度；引物設計避免形成二級結(jié)構而影響擴增；擴增子長度建議在150-300 bp，通常不超過500 bp。

熒光探針設計：

探針序列不與特異性引物識別位點重疊，長度為46-52 nt，序列避免回文序列、內(nèi)部二級結(jié)構和連續(xù)的重復堿基。探針共有四個修飾位點：距離5’端的≥35 nt的中部位置標記一個dSpacer（四氫呋喃，THF），作為核酸外切酶的識別位點；THF位點的上游標記一個熒光基團，下游標記一個粹滅基團，兩個基團的間距為2-4 nt；THF距離3’末端≥15 nt，并且3’末端標記一個修飾基團，例如胺基、磷酸基團或C3-Spacer。

試劑盒組成：

試劑盒儲存：

運輸條件：低溫運輸；

儲存條件：儲存溫度 ≤ -20 oC，避光保存，避免重壓、反復凍融；

產(chǎn)品有效期：12個月。